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[分享] 细胞因子检测技术应用-ELISPOT

目前,ELISPOT已被用于检测药物、化学制剂及其它CK复合物的特性及功能等方面,因此为体内免疫功能的调节效应提供了检测依据。近几年来, ELISPOT技术在肿瘤疫苗评价试验、免疫监测及免疫学研究中越来越被广泛地使用。
    在抗肿瘤免疫及相关领域中的应用
    在许多研究中,该技术已被用于免疫动物外周血淋巴细胞中抗原特异的细胞毒性T细胞(CTL)的数量检测。近期,ELISPOT技术已用于分析和评价从传染病病人的PBMC中检测肽特异的T淋巴细胞以及在癌症病人中诱导肿瘤特异的T细胞的疫苗试验。
    ELISPOT检测T细胞反应时敏感性、特异性和可重复性都很高,操作简单迅速,需要少量标本,在检测抗原特异性细胞数量的同时也反应其功能,并与临床结果相关。ELISPOT平板可以提前大量准备,移液、洗板和读板都可自动化,因而大批量检查也可做到快速高效。在与与其他方法的比较后,ELISPOT很可能成为定量分析肿瘤或病毒特异性的T细胞反应的首选。
    在抗感染免疫中的应用
    CTL在抗病毒感染的免疫应答中占有主要地位,而CD4+辅助性T细胞亚群Th1/Th2的平衡在抵御病毒感染中起着同样重要的作用。在HIV研究方面,由MHC-1类分子加工的不同抗原经CTL识别并产生免疫应答在控制HIV-1感染中同样起重要作用。利用ELISPOT方法检测CK如IFN2γ就可以进一步了解到针对HIV特异的CTL应答及相关免疫信息。
    此外,ELISPOT法还用于评价由HIV-1感染引起粘膜的CD4+T细胞免疫应答以及HIVgp 120g与霍乱毒素共表达的DNA疫苗的免疫源性。在其他研究中,ELISPOT还用来检测通过直肠免疫低剂量甲肝疫苗而产生的细胞免疫应答。在急性的自限性肝炎中,以Th1为主的应答促进细胞介导的免疫,且在控制病毒感染及延缓慢性疾病的发展方面有重要作用。
    在许多抗细菌免疫研究中,该方法也发挥了重要作用。例如:应用ELISPOT试验证实表达大肠杆菌MalE蛋白的重组卡介苗(rBCG.MalE)诱导的T细胞应答是CD4+T细胞依赖的,rBCG.MalE 诱导的特异CD4+T细胞应答存在Th1/Th2平衡转换现象,并逐步形成Th1/ Th2 混合应答。   
    细胞因子检测技术的临床应用
    目前,已经实现临床检验的领域是对肺结核(TB)的检测。而最近的研究热点就是对于移植的预测。受体对供体特异性HLA抗体一直以来都是器官移植的一大障碍,因为它们的存在不仅介导超急性排斥反应而且还可导致急性排斥反应。因此,HLA抗体的存在限制了异体抗原敏感患者对供体器官的需要,因而增加了等待移植的时间。在心脏,肝脏和肾脏异体移植后早期出现的并发症如急性排斥反应与移植前存在的异体免疫临床相关性迫切需要一种恰当的检测方法在器官移植前能了解受体对供体特异性体液免疫的功能状态。
    在接受移植的人群中,部分因有多次输血、或既往有异体移植失败或多次妊娠史体内曾经存在阳性异体抗体,在他们接受异体移植时,现有的检测方法只能显示他们对异体的免疫功能正常。但他们体内存在记忆B淋巴细胞,一旦受到相应HLA 抗原的刺激则会唤起免疫反应,这不仅影响着移植的结果,甚至会出现危及患者生命的、与移植相关的并发症。
    ELISPOT是一种强有效的检测单个抗体分泌细胞的方法,具有很高的敏感性。因此,刺激记忆B淋巴细胞增殖、分化成浆细胞,并建立一种特异性ELISPOT方法检测HLA抗体产生细胞是最佳手段。 如果ELISPOT要进一步推广应用,特别是临床应用,其标准化将是一个十分重要的问题。美国FDA和NIH等已经开始建立ELISPOT的标准化流程,相信随着ELISPOT技术的成熟、标准化程序的建立,它的应用将更加广泛。

 

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