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[分享] 免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择

免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否合适,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使以后的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能有一种适用于所有抗原的固定剂,而是根据不同的抗原性质区别对待。根据我们使用的固定剂介绍如下,供参考。

  一、固定剂的选择及固定时间(详见表1)

  (1)Karovsky's 液pH7.3。

  (2)PAP液(Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative)

  配制见附录一。

表1 各种抗原固定剂的选择及固定时间

待检抗原固定剂的种类固定时间
蛋白质  
冰冻切片不固定,或用95%乙醇,B5固定液10 min
激素冰冻切片,涂片,印片,不固定或丙酮,甲10 min
醇,乙醇,PEG固定,B5固定液固定4℃30 min
免疫球蛋白中性福尔马林,四氯化碳(1%甲醛)30 min
白蛋白95%乙醇含1~5%冰醋酸30 min
纤维蛋白元同上30 min
病毒丙酮,100%乙醇,甲醇,乙醚30 min
糖蛋白PLP,丙酮30 min
脂质Forssman中性福尔马林20 min
抗原2.5%硫代硫酸钠,冰冻切片不固定20 min
免疫电镜PLP,戊二醛,戊二醛—多聚甲醛(Kacnovsky’s 液pH7.3)PEG、ECD-G等30min

  二、切片的处理与粘附。

  免疫组化染色过程较长,洗的次数很多,而且均在振荡洗涤,抗原片附贴不紧,往往在最后的时刻,还没有等显色就会脱落导致前功尽弃,这个环节 虽小却会影响大局,因此,为了保证切片染色成功必须把切片处理好,解除掉片的后顾之忧。

 

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